本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測豬血清、血漿中的抗中性粒細胞彈性蛋白酶抗體（ANEA）水平，檢測范圍覆蓋0.156-10 ng/mL，靈敏度達0.08 ng/mL，適用于炎癥性疾病、自身免疫病及組織損傷評估等領域。
產品名稱 |
豬抗中性粒細胞彈性蛋白酶抗體elisa試劑盒 | 英文名稱 | ANEA ELISA Kit |
貨號 | CS-0361E | 規格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
固相化：微孔板預先包被中性粒細胞彈性蛋白酶抗原。
結合：加入標準品或樣本，血清中的ANEA與固相抗原特異性結合。
檢測：加入HRP標記的抗豬IgG抗體，形成"抗原-抗體-酶標二抗"復合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變為黃色。
測定：用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，抗體水平與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養上清可能因細胞狀態等因素導致檢測波動，建議設復孔。
操作步驟：
1. 試劑準備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），洗滌緩沖液按1:19稀釋。?
標準品梯度稀釋：取6管標準品，按說明書稀釋至0.156-10 ng/mL。
2. 實驗流程
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。?
?檢測?：450nm波長測定吸光度（OD值），15分鐘內完成。
關鍵提示
顯色底物避光保存，混合后應為無色。
終止液加入順序需與顯色一致，充分混勻避免綠色殘留。
使用封板膜防止蒸發，確保孵育溫度穩定。
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